代写毕业论文                                           欢迎光临591论文网,我们将竭诚为您服务,客服QQ:63433700


代写论文

写作流程

职称论文

付款方式

联系方式

期刊目录

SSR鉴定水稻两系杂交种纯度的运用与探讨Ⅱ.不同苗龄取样方法对室内纯度结果的影响

减小字体 增大字体 作者:591代写毕业论文网  来源:http://www.591lw.com  发布时间:2012-10-15 23:57:00

水稻(Oryza sativa L.)的种子发芽率和成秧率是两个概念,前者表示在规定条件和时间内长成的正常幼苗占供检种子数的百分率,后者表示百个芽苗大田形成正常植株的株数。前人用SSR标记检测种子纯度时,用于提取DNA的材料大多来自两个途径[1-10],一是在田间植株上直接剪取叶片,二是在发芽箱内培养幼苗。第一种方法由于省去了种子样品发芽、成秧等环节,其结果与原样品实际纯度有所差异;第二种方法由于发芽箱条件往往设定为种子的最适发芽环境,很多在田间不能成苗的种子在室内可以长成弱苗或残苗,在取样时,根据操作规程,这类小苗都被当成鉴定对象进行了检测。这一批在大田有可能不能成秧的幼苗是否会影响到室内鉴定结果与大田生产中实际纯度的吻合性,目前尚未见报道。本试验模拟田间成秧率取样,探索DNA模板制备前,按室内标准发芽方法获得的大苗、小苗对种子纯度鉴定结果的影响,从而寻求减少或修正利用SSR引物鉴定室内与田间纯度之间误差的途径。
  1 材料与方法
  1.1 材料
  所用杂交水稻品种两优17及其亲本均由湖北省种子管理局统一提供。
  所用引物及试剂均由北京鼎国生物有限公司提供。
  1.2 PCR反应体系
  PCR扩增反应总体积10 μL :10×buffer 1 μL,10 mmol/L dNTP 0.2 μL,50 ng/μL primer 0.2 μL+0.2 μL,2 U/μL Taq酶 0.6 μL,25 ng/μL DNA 1 μL,ddH2O 6.8 μL。PCR扩增程序:94℃预变性4 min; 94 ℃变性15 s,55 ℃退火15 s,72 ℃延伸30 s,35个循环;72 ℃下延伸7 min。扩增产物在浓度为3%、含EB的琼脂糖凝胶中进行电泳后应用凝胶成像系统观察记录。
  1.3 DNA模板制备和引物筛选
  DNA模板的制备采用农业部推荐的简易提取DNA法。采用10个单株幼苗抽提的DNA混合物做模板,以消除杂株可能对筛选结果的干扰,然后用农业部推荐的44对两系杂交种常用SSR引物分别对两优17及其父母本DNA进行扩增,扩增产物在含EB的3%的琼脂糖凝胶电泳后成像观察。从中筛选出多态性高、共显性强、谱带清晰、杂株检出率高的引物RM21鉴定两优17。
  1.4 室内大苗和小苗的分类及纯度鉴定
  从两优17中随机抽取900粒种子,按GB/T 3543.4—1995进行发芽试验。发芽两周后按苗高分成两类:小苗≤3 cm,大苗>3 cm。将这两类苗分别用RM21引物进行纯度鉴定。 1.5 样品的田间纯度鉴定
  从SSR法室内检测的同一份样品中随机抽出部分种子进行田间正季纯度鉴定。种植成500株的小区,共50行,每行10株,株距17 cm,行距27 cm。在小区前端种植该样品的不育系和恢复系亲本各两行(20株),作为田间杂株比对标样。鉴定方法根据农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定标准(GB/T 3543.5—1995)执行。
  2 结果与分析
  2.1 室内样品纯度鉴定结果
  从两优17中随机抽取的900粒种子中有745粒发芽,发芽率为82.8%,将这两类苗用SSR引物RM21进行纯度鉴定。室内检测结果表明(表1),745个芽苗中,小苗191株,占总苗数25.6%,其中检出杂株31株,小苗杂株率16.2%,纯度83.8%;大苗554株,占总苗数74.4%,其中检出杂株74株,大苗杂株率13.4%,纯度86.6%。
  2.2 田间正季鉴定结果
  田间鉴定与室内发芽所用的种子为同一份样品。500株中有杂株48株,其中不育系9株,恢复系3株,其他异形株36株,杂株率9.6%,纯度90.4%(表1)。
  2.3 室内与田间样品纯度鉴定结果比较
  样品田间正季纯度鉴定结果比室内样品的总体纯度高4.5个百分点,比大苗的纯度高出3.8个百分点,比小苗的纯度高出6.6个百分点。室内SSR鉴定中去掉小苗后,样品的总体纯度提高0.7个百分点,纯度值上升0.8%。大苗纯度鉴定结果与田间鉴定结果吻合度最高。
  3 小结与讨论
  结果表明,室内检测取样的幼苗大小对纯度鉴定结果有明显的影响。而在大田条件下,种子存在成秧率的问题,室内的弱苗、残苗在大田中不能正常成秧,因此对大田纯度不构成影响。按目前通用的单个引物检测种子纯度的操作规程,是将样品中无论大苗、小苗均全部取样进行检测,并用这个纯度结果去代表大田生产的质量状况。这个结果是种子的分子生物学纯度,实际上是一个微观理论值,而种子质量标准规定判断种子质量优劣的依据则是大田生产表现的植物形态学纯度,是一个宏观现实的数值。实际操作中将这类不能成秧的弱苗也纳入检测,使得室内检测结果与大田种植结果之间存在一定的偏差。由于不同样品中混杂的杂株类型不同,生活力也会不同,这种偏差对SSR引物检出纯度的影响不同。因此,在室内鉴定时,如何取样才能消除取样误差,使室内纯度鉴定结果更能反映大田生产的真实纯度,建议在进一步研究的基础上,将明显不能成秧的小苗或弱苗剔出检测群体。
  参考文献:
  [1] 戚华雄,杨蜀兰,王 斌,等.用聚合酶链式反应技术鉴定杂交稻种子纯度的初步研究[J].湖北农业科学,1999(1):12-14.
  [2] 金伟栋,洪德林.杂交水稻品种纯度鉴定研究进展[J].种子,2005, 24(8):49-54.
  [3] 陈兆贵,梁展鹏.杂交水稻种子纯度分子鉴定技术研究[J].中国种业,2009(1):50-52.
  [4] 张 辉,姜 勇.杂交水稻品种鉴定和纯度分析技术研究进展[J].安徽农业科学,2009,37(20):9416-9419.
  [5] 殷兆晴,王玉平,周黎军,等.杂交稻种子纯度的SSR分子检测及应用研究[J].西南农业学报,2006,19(6):1000-1004.
  [6] 李进波,杨国才,费震江,等.两优932中不同串粉混杂株型的DNA指纹分析[J].分子植物育种,2005,3(2):209-212.
  [7] 薛灿辉,朱克永,陈祖武,等.利用微卫星标记鉴定金优207杂种纯度技术研究[J].湖南农业科学,2005(5):6-8.
  [8] 李稳香,詹庆才.杂交水稻种子纯度SSR指纹图谱标记鉴定技术研究[J].中国种业,2006(3):21-22.
  [9] 李进波,方宣钧,杨国才,等.两系杂交稻亲本SSR指纹图谱的建立及其在种子纯度鉴定中的应用[J].杂交水稻,2005,20(2):50-53.
  [10] 苏顺宗,黄玉碧,杨俊品,等.利用SSR鉴定水稻杂交种子纯度的研究[J].种子,2003(1):23-25.

 
 

本文选自591代写论文网:专业代写毕业论文-致力于代写本科论文,代写硕士论文,代写职称论文,代写mba论文

Tags:

作者:http://www.591lw.com
  • 好的评价 如果您觉得此文章好,就请您
       0%(0)
  • 差的评价 如果您觉得此文章差,就请您
       0%(0)

文章评论 评论内容只代表网友观点,与本站立场无关!

   评论摘要(共 0 条,得分 0 分,平均 0 分) 查看完整评论